CFSE , of carboxyfluoresceïne - succinimidyl - ester , is een fluorescerende cel kleuring oplossing gebruikt in lymfocytenmigratie studies . Lymfocyten zijn de het bloed witte bloedcellen die de mogelijkheid om uit te gaan van de bloedstroom naar buitenaardse micro-organismen vast te leggen , een belangrijke rol bij immuun -defensie te spelen hebben . CFSE kan ook worden gebruikt om het etiket thymocyten en embryonale cellen , volgens " Immunology and Cell Biology. " Human Lymphocite Staining Protocol
Technici
bereiden celsuspensie met 20 miljoen cellen per ml in 0,1 procent foetaal runderserum ( FBS ) en fosfaat gebufferde zoutoplossing ( PBS ) . Ze voegen CFSE en laat vering zitten gedurende acht minuten , volgens de Universiteit van Kansas Medical Center. Voorverwarmde FBS toegevoegd en de cellen worden geïncubeerd in een waterbad bij 98,6 graden Celsius gedurende 10 minuten . Cellen worden daarna gedurende vijf minuten , wordt supernatant verwijderd en de cellen worden gewassen in een oplossing van 2 procent FBS /PBS driemaal . Cellen gefixeerd met paraformaldehyde .
Vereenvoudigd CFSE kleuringsprotocol
Technici
centrifuge bloedmonsters , het elimineren van de rode cellen . Later , ze wassen de lymfocyten met PBS om gratis eiwit te verwijderen . Om celdeling nemen na twee dagen , wordt CFSE in geringe concentraties toegevoegd gedurende acht minuten , vervolgens werd de reactie geblokkeerd met foetaal kalfsserum . Cellen worden tweemaal gewassen met PBS /FCS . Dit protocol kan worden gebruikt in " in vivo " of " in vitro " experimenten volgens Hedrick The Lab aan de University of California .
Protocol voor de activatie van naïeve CD8 T cellen in vitro
een naïeve T-cel is een lymfocyt die is gedifferentieerd in het beenmerg . Dit celtype als rijpe en cellen aan nieuwe pathogenen die het immuunsysteem nooit tegengekomen . Technici incubeer Influenza virus en cel monsters op ijs gedurende 30 minuten , centrifuge en blijven het broedproces 18 uur bij 98,6 graden Fahrenheit . Later worden de cellen gekleurd met CFSE en resultaten worden geanalyseerd onder flowcytometrie.
|
